目的 研究Samc基因在肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)诱导的神经母细胞瘤(NB)SK-N-SH细胞凋亡中的增强作用.方法 1.利用反转录(RT)-PCR从人胚肾293细胞中扩增人Smac基因全长cDNA,通过TA克隆构建重组T载体pGEM-T/Smac.2.将目的 片段从重组T载体上酶切下来,构建真核细胞表达载体pcDNA3.1/Smac,并转染人NB SK-N-SH细胞.用新霉素G418筛选稳定细胞株SK-N-SH/Smac,并用Western blot鉴定Smac基因的过表达.3.用1 000μg/L的TRAIL作用于过表达Smac基因的SK-N-SH/Smac和普通的SK-N-SH细胞24 h.采用流式细胞分析检测细胞凋亡百分率.另设无TRAIL干预的SK-N-SH/Smac及正常SK-N-SH对照组.4.比色法测定各组细胞中caspase-8酶活性.结果 1.成功建立稳定过表达Smac基因的NB克隆株SK-N-SH/Smac.2.流式细胞分析显示1 000μg/L的TRAIL作用24 h后,过表达Smac基因的SK-N-SH细胞凋亡百分率显著高于正常对照的SK-N-SH细胞[(44.8±4.71)
作者：周兆群；陈辉；邵小松；陆超；江涛；王晓榕
来源：实用儿科临床杂志 2008 年 23卷 15期
