目的 通过体外培养白血病细胞,制备膜表面表达卡介苗(BCG)热休克蛋白70 (HSP70)瘤苗,研究其抗瘤作用和机制.方法 含重组人干细胞因子(SCF)、重组人flt-3配体(FL)、白细胞介素(IL)-3和IL-6的无血清培养液Stemspan@体外培养急性髓系白血病(AML)细胞,含SCF、FL、IL-3和IL-7的无血清的改良Iscove培养基(IMDM)体外培养B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞,通过观察细胞生长形态和免疫表型测定验证培养的白血病细胞.利用脂质体2000将重组载体pDisplay-HSP70转染到已被鉴定的白血病细胞,免疫荧光单克隆抗体进行细胞表面修饰鉴定.对转染后的白血病细胞免疫原性进行检测:实验组分为未进行转染的白血病细胞组(wt-LC组),转染空载体pDisplay的白血病细胞组(pDisplay-LC组)及转染重组载体pDisplay-HSP70的白血病细胞组(HSP70-LC组).收获各组细胞,与自体外周血T淋巴细胞混合培养72 h,羟基荧光素双乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记,流式细胞术测定淋巴细胞增殖指数,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测干扰素(IFN)-γ水平;各组白血病细胞与T淋巴细胞混合培养6d后,加入新鲜白血病细胞(效∶靶分别为10∶1、20∶1、40∶I、80∶1)共培育12 h,乳酸脱氢酶(LDH)释放改良法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的杀伤活性.结果 短期培养的白血病细胞呈
作者：李晓玲；刘春雷；孙立荣
来源：中华实用儿科临床杂志 2015 年 30卷 3期
