目的 以幽门螺杆菌外膜脂蛋白Lpp20为目的基因,构建H.pylori Lpp2基因的真核表达重组载体pcD-NA3.1(+)-Lpp20,为H. Pylori核酸疫苗的研制奠定实验基础.方法 用Primer 5.0软件分析GenBank中H.pylori外膜脂蛋白Lpp20基因序列,设计合成相应特异性引物,引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,以H.pylori 26695株基因组为模板,PCR扩增Lpp20目的基因片段,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)多克隆酶切位点中,构建重组体pcDNA3.1(+)-Lpp20;通过酶切分析,PCR鉴定及测序鉴定,筛选阳性重组体.结果 以H.pylori 26695株基因组DNA为模板扩增出特异的Lpp20基因片段,大小约为528 bp;双酶切及测序鉴定证明成功构建了H. Pylori真核表达重组载体pcDNA3.1(+)-Lpp20.结论 PCR扩增得到了大小约为528 bp的H.pylori Lpp20目的基因片段;并成功构建了pcD-NA3.1(+)-Lpp20真核表达重组载体.
作者：刘志杰；张艳；余敏君；方明礼；黎村艳
来源：实用预防医学 2007 年 14卷 3期
