目的 构建5号染色体开放阅读框13(chromosome 5 open reading frame 13,C5orf13)基因siRNA慢病毒载体,探讨其对胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 针对人C5orf13基因设计3个不同的siRNA靶点,构建重组质粒,包装GV115慢病毒.取对数生长期SGC-7901细胞,分为KD1组、KD2组、KD3组和阴性对照组,前3组分别转染3个不同siRNA靶点的GV115慢病毒,阴性对照组转染阴性对照慢病毒.转染72 h,用嘌呤霉素筛选稳转细胞株,4组转染效率均＞90％时,采用实时荧光定量PCR法检测4组细胞C5orf13 mRNA相对表达量,筛选出表达最低的KD2组细胞为C5orf13敲低组.取SGC-7901细胞为空白对照组.采用MTT实验检测空白对照组、阴性对照组、C5orf13敲低组转染后培养0、24、48、72、96 h时细胞增殖吸光度(optical density,OD)值,采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,采用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力.结果 KD1组(0.45±0.04)、KD2组(0.25±0.02)、KD3组(0.49±0.04)细胞C5orf13 mRNA相对表达量均低于阴性对照组(1.00±0.04)(P＜0.05),KD1组、KD3组均高于KD2组(P＜0.05),KD1组与KD3组比较差异无统计学意义(P＞0.05).空白对照组、阴性对照组、C5orf13敲低组转染后培养0 h时细胞增殖OD值比较差异无统计学意义(P＞0.05);C5orf13敲低组

作者：张高丽；刘立业

来源：中华实用诊断与治疗杂志 2022 年 36卷 7期