目的 应用寡核苷酸芯片技术高通量分析原发性肝癌与癌旁组织以及正常肝组织的基因表达差异,探索与疾病进展相关的靶基因.方法 抽提原发性肝癌患者的癌组织、癌旁组织以及正常肝组织的总RNA,应用芯片实验室(Lab-on-chip)进行RNA质量检测;总RNA纯化后进行逆转录cRNA合成、荧光标记和纯化,将癌组织和正常肝组织、癌组织和癌旁肝组织的cRNA探针分别与Agilent寡核苷酸芯片(21,074探针)进行杂交,洗涤后应用Agilent Scanner获取图像,Feature Extraction软件进行定量分析处理.挑选明显差异表达的基因进行SYBR GreenI染料掺入的荧光realtime RT-PCR验证.结果 (1)癌组织、癌旁肝组织以及正常肝组织的总RNA质量高,反转录cRNA及荧光标记质量好;(2)2倍差异表达基因中,上调基因共420个,下调基因共552个,其中包括上调的基质金属蛋白酶相关基因(MMP)-9、-11和-12;(3)挑选5倍上调基因MMP-12为代表,以β-actin为内对照的real time RT-PCR结果提示,MMP-12在癌、癌旁和正常肝组织中的2-△ct值分别为0.0030、0.0028和0.0020.结论 (1)应用Agilent寡核苷酸芯片高通量、高效率地分析原发性肝癌发生发展过程中的基因表达差异,可以筛选新的治疗靶点;(2)原发性肝癌的发生发展涉及多基因、多步骤,是一个复杂的过程;(3)MMP相关基因表达
作者：刘秀峰；施瑞华；张国新；秦叔逵
来源：实用肿瘤学杂志 2007 年 21卷 1期
