目的研究pcDNA3.0-tyr在正常人成纤维母细胞株(GM0639细胞)中的表达.方法 pcDNA3.0-tyr真核表达质粒扩增、纯化后经测序、酶切鉴定;电穿孔法将pcDNA3.0-tyr转染GM细胞,RT-PCR检测;测定490 nm吸光度值,细胞爬片Fontana染色,证实酪氨酸酶基因表达及其表达水平.结果测序及酶切结果提示pcDNA3.0-tyr质粒含有酪氨酸酶全长cDNA片段;转染pcDNA3.0-tyr的细胞的PCR产物长度与预期长度一致,而转染pcDNA3.0空载体的细胞PCR产物无此条带;转染pcDNA3.0-tyr的GM细胞的A490显著高于转染空载体的细胞及未转染的GM细胞(P<0.001);转染pcDNA3.0-tyr的GM细胞Fontana染色于胞浆内见棕褐色银沉着颗粒,而转染pcDNA3.0空载体以及未转染的细胞缺乏此颗粒.结论 pcDNA3.0-tyr可体外转染GM0639细胞并成功表达,为后续研究奠定基础.
作者：胡春洪；罗加林；曹建平；周献峰；郑斯英；丁乙
来源：苏州大学学报（医学版） 2005 年 25卷 6期
