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目的 探讨维生素D信号通路对反复种植失败(RIF)患者子宫内膜容受性的影响及可能的作用机制.方法 收集2019年5月至2021年2月于海南省妇女儿童医学中心就诊的30例RIF患者为RIF组,选择同期因输卵管和/或男性因素接受IVF-ET治疗,并在子宫内膜活检采集后的移植周期中实现临床妊娠的30例女性作为对照组.分别于自然月经周期黄体生成素高峰后7 d(对照组)或激素替代疗法(HRT)周期服用孕酮后5 d(RIF组)收集两组患者的子宫内膜组织与外周血的血液样本;体外细胞实验选择人子宫内膜间质细胞(hESCs)SCRC-2002细胞系.免疫组织化学染色法检测VD代谢酶CYP27B1和VD受体(VDR)在子宫内膜组织中的表达;利用孕酮(P4)与二丁酰环磷酸腺苷(cAMP)联合诱导法使hESCs发生蜕膜化;将携带沉默VDR(sh-VDR)与对照序列(sh-NC)的慢病毒载体转染至hESCs中,并将细胞分为:cAMP+P4+sh-NC组、cAMP+P4+sh-NC+VD组和cAMP+P4+sh-VDR+VD组,RT-PCR检测蜕膜化标志物催乳素(PRL)和胰岛素生长因子结合蛋白(IGFBP1)mRNA 表达;P4 处理转染后的 hESCs,并将细胞分为:sh-NC 组、P4+sh-NC 组、P4+sh-NC+VD组与 P4+sh-VDR+VD组;CCK-8检测细胞的增殖能力;Western blotting检测细胞中上皮细胞标志物β-Catenin、E-cadherin、ZO-1与间质细胞标志物N-cadherin、CLDN5

作者:林芳婷;吴清瑜;王茹;李波

来源:生殖医学杂志 2023 年 32卷 5期

知识库介绍

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作者:
林芳婷;吴清瑜;王茹;李波
来源:
生殖医学杂志 2023 年 32卷 5期
标签:
维生素D 反复种植失败 基质细胞 细胞增殖
目的 探讨维生素D信号通路对反复种植失败(RIF)患者子宫内膜容受性的影响及可能的作用机制.方法 收集2019年5月至2021年2月于海南省妇女儿童医学中心就诊的30例RIF患者为RIF组,选择同期因输卵管和/或男性因素接受IVF-ET治疗,并在子宫内膜活检采集后的移植周期中实现临床妊娠的30例女性作为对照组.分别于自然月经周期黄体生成素高峰后7 d(对照组)或激素替代疗法(HRT)周期服用孕酮后5 d(RIF组)收集两组患者的子宫内膜组织与外周血的血液样本;体外细胞实验选择人子宫内膜间质细胞(hESCs)SCRC-2002细胞系.免疫组织化学染色法检测VD代谢酶CYP27B1和VD受体(VDR)在子宫内膜组织中的表达;利用孕酮(P4)与二丁酰环磷酸腺苷(cAMP)联合诱导法使hESCs发生蜕膜化;将携带沉默VDR(sh-VDR)与对照序列(sh-NC)的慢病毒载体转染至hESCs中,并将细胞分为:cAMP+P4+sh-NC组、cAMP+P4+sh-NC+VD组和cAMP+P4+sh-VDR+VD组,RT-PCR检测蜕膜化标志物催乳素(PRL)和胰岛素生长因子结合蛋白(IGFBP1)mRNA 表达;P4 处理转染后的 hESCs,并将细胞分为:sh-NC 组、P4+sh-NC 组、P4+sh-NC+VD组与 P4+sh-VDR+VD组;CCK-8检测细胞的增殖能力;Western blotting检测细胞中上皮细胞标志物β-Catenin、E-cadherin、ZO-1与间质细胞标志物N-cadherin、CLDN5