目的 研究建立人肝细胞体外乙型肝炎病毒(HBV)感染模型和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)黏附模型,为后期研究小分子抗体Fab的作用打下基础.方法 体外原代培养人肝细胞,对人原代肝细胞进行HBsAg黏附实验及HBV感染实验.采用正常人胎肝细胞系(L-02)及鼠原代肝细胞进行实验对照.倒置相差显微镜下观察细胞形态,生化法检测其白蛋白分泌功能.免疫组化法检测HBsAg黏附情况和HBV感染肝细胞内HBsAg的表达.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肝细胞感染HBV后HBsAg的持续表达.PCR检测肝细胞内HBV复制中间体-闭合环状双链DNA(cccDNA).结果 人原代肝细胞体外培养达2周以上.HBsAg黏附实验检测到HBsAg可黏附于人原代肝细胞、L-02、鼠原代肝细胞胞膜.HBV体外仅感染人原代肝细胞,从第2天起即可检测到细胞培养上清中存在HBsAg,并持续到观察结束第16天,免疫组化检测人原代肝细胞内HBsAg呈阳性;PCR检测到人原代肝细胞内存在HBV-cccDNA,而L-02及鼠原代肝细胞实验检测结果均为阴性.结论 人原代肝细胞体外分离培养成功,HBsAg黏附和HBV感染模型初步建立于人原代肝细胞.
作者：潘桃；唐莉；习东；魏来；明长生；陈知水
来源：华中科技大学学报（医学版） 2006 年 35卷 4期
