目的 探讨miR-20b是否直接靶向VEGF3'-非编码区(3'-UTR)而调控其表达.方法 采用miRanda软件预测VEGF3'-UTR是否存在miR-20b的结合位点;使用PCR方法扩增RAW264.7细胞VEGF基因3'-UTR序列,经双酶切后克隆到pmiR-RB-ReportTM质粒海肾荧光素酶的下游,得到pmiR-RB-Repor tTM-VEGF 3'-UTR双荧光素酶重组质粒,使用电泳法和测序法进行验证;将重组质粒或空质粒与miR-20b模拟物或其对照共转染HeLa细胞,24 h后检测相应荧光素酶活性.结果 VEGF3'-UTR存在miR-20b的结合位点;获得了含VEGF 3'-UTR的双荧光素酶报告载体;重组质粒与miR-20b模拟物共转染组HeLa细胞的荧光素酶活性明显低于空质粒转染组(P＜0.05).结论 成功构建小鼠VEGF基因3'-UTR双荧光素酶报告载体,miR-20b可以直接靶向VEGF3'-UTR而负性调控其表达.
作者：陶象男；汪忆梦；宋传旺
来源：华中科技大学学报（医学版） 2016 年 45卷 1期
