目的：通过 shRNA 沉默肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumour necrosis factor receptor associated factor 6, TRAF6)基因表达,研究TRAF6沉默基因对内毒素/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)诱导的急性肝衰竭小鼠炎症反应的影响。方法通过体外实验筛选针对TRAF6基因的最有效小干扰 RNA(siRNA)序列,采用流体力学注射法将 pTRAF6-shRNA表达质粒转染BALB/c小鼠,24 h后重复注射1次。第2次注射后24 h,予 LPS/D-GalN 腹腔注射制备急性肝衰竭内毒素炎症模型。设正常对照组、模型对照组、空白质粒/LPS组及 RNAi/LPS组。观察各组小鼠肝脏病理变化, Real-time PCR检测TRAF6、IL-6及COX-2 mRNA的表达,ELISA检测血清 TNF-α、IL-1β及 TGF-β1水平变化,West-ern blot检测肝细胞TRAF6、NF-κB p65的表达。结果 Real-time PCR及Western blot检测显示,pTRAF6-shRNA1能有效沉默TRAF6 mRNA 及蛋白表达,其中 TRAF6 mRNA 表达较正常小鼠下降约60.13
作者：陈锋；张芙蓉；何生松；庞然；许娟娟；董继华
来源：华中科技大学学报（医学版） 2016 年 45卷 3期
