目的 探讨高糖条件下肾小球系膜细胞Toll样受体4(TLR4)及其信号通路中下游因子MyD88、核因子-κB(NF-κB)以及炎性因子的表达变化,论证高糖环境下血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与TLR4的对话关系,以期阐明TLR4信号通路在糖尿病肾病(DN)发病机制中的作用.方法 设计3对针对大鼠TLR4基因的特异性siRNA片段以及带有绿色荧光的阴性对照,筛选出转染效率最高的siRNA,用于后续实验.第1部分实验在高糖的基础上分别加入AngⅡ、TLR4siRNA、血管紧张素Ⅱ受体阻断剂(ARB)、阴性对照siRNA,探讨高糖对各组细胞TLR4、MyD88及NF-κB表达的影响;第2部分实验在AngⅡ的基础上分别加入高糖、TLR4 siRNA、ARB、阴性对照siRNA,探讨AngⅡ对各组细胞TLR4,MyD88及NF-κB表达的影响.采用荧光定量PCR检测各组TLR4、MyD88 mRNA的表达,Western blot检测TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表达水平的变化,ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的表达情况.结果 高糖及AngⅡ都可以上调TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及TLR4、MyD88 mRNA的表达水平(均P＜0.05),也可上调IL-6及MCP-1的表达(均P＜0.01)且二者协同刺激情况下上调更明显.siRNA干扰及ARB可下调TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及TLR4、MyD88 mRNA的表达,下调IL-6及MCP-1的表达,与高

作者：王瑜；刘思逸；程玉花；张莉；江磊；吕金雷；陈钦开

来源：华中科技大学学报（医学版） 2017 年 46卷 3期