目的 探讨PM2.5对Raw264.7巨噬细胞自噬及炎症反应的影响及机制.方法 CCK-8检测PM2.5对Raw264.7巨噬细胞活性的影响,透射电镜观察自噬结构;Ad-mCherry-GFP-LC3B转染细胞后荧光显微镜观察自噬通量,以探讨PM2.5对巨噬细胞活性和自噬流的影响.再设置对照组、PM2.5组、雷帕霉素(Rap,自噬诱导剂)组、羟氯喹(HCQ,自噬抑制剂)组、PM2.5+HCQ组、PM2.5+TAK-242[Toll样受体4(TLR4)抑制剂]组.Western blot法检测自噬相关蛋白,包括微管相关轻链蛋白3比值(LC3Ⅱ/Ⅰ)、p62、组织蛋白酶B(CTSB)、溶酶体膜蛋白2(LAMP2)和炎症相关蛋白,包括Toll样受体4(TLR4)、核苷酸结合域样受体蛋白3(NLRP3)的表达水平;酶联免疫吸附试验检测相关炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-18、IL-10分泌水平.结果 Raw264.7巨噬细胞活性随着PM2.5浓度的增加和作用时间的延长而降低.透射电镜观察到PM2.5组有较多自噬空泡和双膜自噬体,自噬溶酶体少见,且荧光显微镜下PM2.5组绿色荧光淬灭不明显,Merge后黄红色荧光比值高于对照组和Rap组(P<0.05).相较于对照组,PM2.5组NLRP3、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、CTSB、IL-1β、IL-18的表达上调,LAMP2、IL-10表达下调(P<0.05),而HCQ抑制自噬的同时,促进NLRP3、IL-1β、IL-18的表达,抑制IL-10表达(P<0.05).相较于对照组、PM2.
作者:黄秋阳;王伟;罗书;郑文武;冯健;叶强;郑舒展
来源:天津医药 2022 年 50卷 11期