目的 构建能表达靶向肾母细胞瘤过度表达基因(NOV)的小干扰RNA(siRNA)的重组质粒,研究NOV对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响.方法 以NOV为目的 基因,以质粒psiRNA-hH1neo为载体,构建能在真核细胞中表达的靶向NOV的siRNA的重组质粒psiRNA(psiRNA1、2、3)和阴性对照重组质粒pconsiRNA.限制性酶切和测序鉴定构建成功后,脂质体介导重组质粒转染HSC,依据转染质粒的不同将HSC分为psiRNA1组、psiRNA2组、psiRNA3组、阴性对照pconsiRNA组,并以未转染重组质粒的HSC为空白对照组.半定量RT-PCR检测HSC的NOV、MMP-1、TIMP-1 mRNA表达情况,MTT法检测细胞增殖.结果 限制性酶切和测序鉴定表明成功构建了 NOV siRNA表达质粒;与阴性对照组相比,转染外源重组质粒psiRNA2的HSC内NOV的mRNA表达水平下降(P<0.05),MMP-1 mRNA表达水平下降不明显(P>0.05),而TIMP-1 mRNA表达水平明显下降(P<0.05).与空白对照组相比,转染外源重组质粒psiRNA2的HSC增殖活性显著降低(P<0.05).psiRNA1组、psiRNA3组的HSC内NOV、MMP-1和TIMP-1 mRNA的表达及HSC增殖活性均无明显下降(P均>0.05).结论 NOV可促进HSC增殖及表达TIMP-1增加,而对MMP-1表达影响不大,提示NOV可以作为肝纤维化基

作者：徐冬；任精华；陈琼；姚津剑

来源：胃肠病学和肝病学杂志 2008 年 17卷 8期