[目的]优化DNA甲基化PCR的反应体系及扩增参数,为基因甲基化的研究建立一个最佳的PCR方法.[方法]以MHCC-97H肝癌细胞株AFP基因启动子区为模板,分析DNA甲基化反应体系中Mg2+、TaqDNA聚合酶用量、加入时间、退火温度及循环方式对甲基化PCR扩增的影响.[结果]反应体系20 μl:模板DNA(MoDNA),2 μl;正向引物,1 μl;反向引物,1 μl;10× PCR Buffer,2.5 μl;2 mmol/L dNTPs,2.5 μl;Taq酶,0.4 μl;MgCl2,2μl;H2O,8.6μl.PCR程序采用Touch Down PCR.[结论] 优化了适用于AFP基因甲基化PCR的反应体系,为利用甲基化PCR分析方法研究肝癌等肿瘤发生机制奠定基础.
作者：马勇；俞媛；王玮；陈立军
来源：武警医学院学报 2008 年 17卷 12期
