利用途径工程的基本原理,拟在大肠杆菌核苷酸代谢途径中构建腺苷(AR)转化为腺苷三磷酸(ATP)的新途径,故需使细胞内的腺苷脱氨酶基因(add)缺失.通过构建大肠杆菌MC4100 DNA的基因文库,筛选得到含腺苷脱氨酶基因的DNA片段.构建表达质粒pBD1和pBD2并实现了表达.在此基础上构建了add基因缺失的带卡那霉素抗性基因的线性5.2kbDNA分子,同时转化JM83、MC4100、BL21(DE3).经遗传稳定性实验和DNA分子杂交鉴定,确认得到了来自JM83的两株add基因缺陷株J1和J2.再对菌株J1、pUC18/JM83、pBD1/JM83的细胞粗提液做腺苷脱氨酶的酶活鉴定比较,结果表明则没有腺苷脱氨酶活性,pBD1/JM83有比pUC18/JM83强的腺苷脱氨酶活性.
作者：钱红亮；曾洋；叶江；张惠展
来源：微生物学报 2002 年 42卷 6期
