[目的]研究ste7和ste15基因双敲除对依博素生物合成的影响.[方法]通过基因同源重组双交换,对ste15基因缺失突变株Streptomyces sp.139(ste15-)再进行ste7基因的敲除,经Southern杂交验证,获得了ste7和stel5双基因缺失变株Streptomyces sp.139(ste7-ste15-).对该突变株进行了基因互补.气相色谱分析ste7和ste15双基因缺失突变株及互补株产生的胞外多糖单糖组分,排阻色谱测定衍生物的重均分子量,ELISA法测定衍生物的IL-IR拮抗活性,并与依博素进行比较分析.[结果]获得ste7和ste15双基因缺失株Streptomyces sp.139(ste7 ste15)及互补株.双基因缺失株产生的胞外多糖与依博素相比,葡萄糖与岩藻糖含量明显降低,分子量变小,生物活性明显下降.基因互补株产生的胞外多糖中葡萄糖与岩藻糖含量恢复.[结论]ste7和ste15基因编码产物参与了依博素生物合成中单糖重复单元序列的形成过程,在依博素的生物合成中起重要作用;变株产生的依博素新衍生物体内外活性有待进一步研究.
作者：白利平；姜蓉；单俊杰；郭连宏；张洋；李元
来源：微生物学报 2009 年 49卷 4期
