[目的]通过分析结核分枝杆菌无毒株H37Ra的全基因组序列,并与H37Rv基因组序列比较,发现pabB和lpdA预测的启动子区发生了突变.我们利用报告基因,确认启动子突变与其基因转录水平的关系,探索结核分枝杆菌H37 Ra毒力丧失的内在原因.[方法]利用生物信息学方法预测这两对基因的启动子区,采用PCR技术克隆这两对基因的启动子,与分枝杆菌启动子探针载体pMC210相连,DNA测序证实连接片段正确后,用电穿孔法将重组质粒转化至耻垢分枝杆菌mc~2155.利用Quantitative Real-Time RT-PCR检测报告基因lacZ转录水平的差异,进一步验证这两对基因启动子的突变对相应基因转录水平的影响.[结果]Quantitative Real Time PCR检测结果显示H37RapabB启动子活性是H37Rv pabB启动子活性的6倍(p<0.05),而H37Rv LpdA启动子的活性是H37Ra lpdA启动子的2倍(p<0.05).[结论]pabB,lpdA的启动子在H37Ra中的突变对其启动子的活性产生了影响,其中lpdA启动子的突变可能与结核分枝杆菌H37Ra的毒力丧失有关.
作者：孙青；吕亮东；姚玉峰；赵英伟
来源：微生物学报 2010 年 50卷 4期
