[目的]本文拟克隆普通变形杆菌(Proteus vulgaris)脂肪酶基因,并实现其在大肠杆菌中的高效表达,并检验外源表达脂肪酶的催化性质.[方法]通过PCR方法,从P.vulgaris基因组中扩增其脂肪酶基因(PVL),并将其开放读码框区域连接到表达载体pET-DsbA及pMBP-P上,在大肠杆菌中用IPTG诱导表达.我们对培养基组分及培养条件进行优化,以获得最高的酶产量.用Ni柱亲和层析法对所得重组脂肪酶进行纯化,并考察其酶学性质.[结果]PVL基因编码区含864个碱基,编码含287个氨基酸的酶蛋白.该序列在GenBank的登录号为FJ643627.PVL,基因在大肠杆菌BL21内诱导表达的最佳条件为:在pH8.5的LB培养基中添加15 g/L葡萄糖及200 mg/L氨苄青霉素,在培养至OD600为1.2时加入100 mg/L IPTG,15℃诱导15 h,最高酶活达到192.2 U/mL.通过亲和层析纯化了重组脂肪酶,得到一个约31 kDa的蛋白条带.外源表达的脂肪酶的催化特性与野生菌脂肪酶相似,具有催化的位置非特异性,对长链脂肪酸酯亲和性最高.[结论]PVL基因在大肠杆菌中的高效表达为P.vulgaris脂肪酶的进一步研究与应用奠定基础.
作者：卢亚萍；顾菁；汤彦翀；吕凤霞；别小妹；陆兆新
来源：微生物学报 2010 年 50卷 6期
