[目的]L-缬氨酸生物合成的前体物质是丙酮酸.为了增加磷酸烯醇式丙酮酸向丙酮酸的代谢流向,优化L-缬氨酸前体物质的供应,以一株积累L-缬氨酸的谷氨酸棒杆菌V1 (Corynebacterium glutamicum V1)为对象,构建磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因敲除的重组菌株C.glutamicum V1-△pepc,并研究pepc敲除后菌株生理特性的改变.[方法]运用交叉PCR方法得到pepc基因内部缺失的同源片段△pepc,并构建敲除质粒pK18mobsacB-△pepc.利用同源重组技术获得pepc基因缺陷突变株C.glutamicum V1-△pepc.采用摇瓶发酵对C.glutamicum V1-△pepc进行发酵特性的研究.对谷氨酸棒杆菌模式菌株C.glutamicum ATCC 13032、出发菌株C.glutamicum V1和敲除菌株C.glutamicum V1-△pepc的丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)、丙酮酸脱氢酶(Pyruvate dehydrogenase,PDH)、丙酮酸羧化酶(Pyruvate carboxylase,PC)分别进行测定和分析.[结果]PCR验证以及PEPC酶活测定都表明筛选到pepc缺陷的突变菌株C.glutamicum V1-△pepc,摇瓶发酵结果表明,突变菌株C.glutamicum V1-△pepc不再积累L-缬氨酸而是积累L-精氨酸达到7.48 g/L.酶活测定结果表明出发菌株的PDH和PC酶活均低于模式菌株C.glutamicum ATCC13032和重组菌株C.glutamicum V1-△pepc,出发菌株的P

作者：仇爱梅；窦文芳；李会；许正宏

来源：微生物学通报 2012 年 39卷 9期