[背景]对猪流行性腹泻病毒 (Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)经典毒株与流行毒株S蛋白氨基酸序列比对显示,变异位点主要集中在S蛋白的N端.[目的]鉴定PEDV流行毒株S蛋白高变区(S1oA,1-496 aa)的B细胞线性表位肽,特别是流行毒株特异性B细胞表位肽.[方法]以SDS-PAGE割胶纯化大肠杆菌表达的PEDV流行株SD2014 S蛋白高变区片段(S10ASD2014),免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体;在E.coli中谷胱甘肽巯基转移酶(Glutathione S-transferase,GST)融合表达覆盖S10ASD2014序列全长且彼此重叠8个氨基酸残基的系列16肽.以制备的抗S10ASD2014多抗为一抗,通过Westemblot筛选系列16肽中的阳性反应性16肽,鉴定S10ASD2014上的B细胞线性表位肽;利用抗PEDV经典毒株(CV777)S蛋白高变区片段(S10ACV777)多抗血清鉴定S10AsD2014上的保守性B细胞线性表位肽.[结果]重组表达的S 10ASD2014相对分子质量约为72 kD;纯化的S10ASD2014表位肽能被PEDV阳性血清识别.制备的抗S10ASD2014多抗可以识别PEDV DR 13弱毒株.利用抗S10ASD2014血清和抗S 10ACV777血清从61个GST融合表达的16肽中鉴定到28个阳性反应16肽,其中13个为2种血清共同识别16肽.对24株PEDV不同亚群代表毒株的对应区域进行同源性分析表明2个阳性16肽为保守性表位肽.[结论]确定

作者：刘英杰；李凤平；董世娟；王瑞阳；于瑞嵩；王燕；李震

来源：微生物学通报 2019 年 46卷 7期