[背景]鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer,RA)可引起鸭等多种禽类败血症和浆膜炎,给禽养殖业造成严重经济损失.蛋白疫苗是预防RA感染的重要策略之一.目前,有关RA重组蛋白免疫原性报道较少,且其应用也受到单一蛋白抗原诱导的特异性免疫反应不足的限制.[目的]探究分子伴侣DnaK、外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)和OmpA-DnaK蛋白疫苗在鸭体内诱导的免疫应答,评估其免疫原性,为RA疫苗抗原研发提供依据.[方法]克隆DnaK和OmpA基因并分别与pET-32a(+)载体相连,利用限制性酶切位点NcoI和BamH I将OmpA连接至DnaK基因上游,经原核表达和纯化制得重组蛋白DnaK、OmpA和OmpA-DnaK.3种重组蛋白分别皮下免疫雏鸭2次,检测其血清抗体滴度、淋巴细胞增殖和细胞因子(IL-2和IL-4)水平;以RA-GH5肌肉注射攻毒,检查其组织病理学变化及免疫保护率.[结果]成功表达了 DnaK、OmpA和OmpA-DnaK重组蛋白,分子量分别约为90、60和130 kDa.3种蛋白疫苗均能诱导宿主产生体液和细胞免疫应答,并且诱导的免疫保护反应减轻了 RA引起的组织病理学损伤.与单独DnaK或OmpA免疫相比,OmpA-DnaK显著提高了血清抗体滴度、淋巴细胞增殖指数,以及IL-2和IL-4细胞因子水平.OmpA-DnaK对鸭的免疫保护率为50％,DnaK和OmpA均为30％.[结论]RA重组Omp

作者：钟璐嘉；蒋文灿；蒋鑫；霞雨；曾晓慧；李鑫

来源：微生物学通报 2022 年 49卷 5期