抗原85复合体(Ag85)是BCG合成的能够刺激机体产生细胞免疫和体液免疫的多种成分之一,Ag85A是抗原85复合体组成成分之一,可显著刺激细胞免疫功能增强.为研究经口接种Ag85A的DNA疫苗的免疫效应,根据结核分技杆菌Ag85A的基因序列自行设计了一对PCR引物,以人型结核杆菌H37Rv标准毒力株的DNA为模板,经过PCR扩增出Ag85A目的基因,纯化PCR产物TA克隆入载体pUCm-T载体,蓝白斑筛选将回收的PCR产物用限制性核酸内切酶Xhol和BamHI双酶酶切后,经T4 DNA连接酶作用,与真核表达载体pCDNA3.1+连接,筛选得到的阳性克隆经DNA测序鉴定证实为Ag85A基因,且被克隆到载体pCDNA3.1+中的CMV启动子的下游,成功构建并鉴定的真核表达载体pCDNA3.1+携带Ag85A基因的重组体,命名为pCDNA3.1+/Ag85A.将其转化大肠埃希菌并使之大量扩增,并采用无内毒素提取质粒方法收集此重组质粒DNA,即为可经口途径喂饲小鼠的结核杆菌Ag85A的DNA疫苗,为口服DNA疫苗的临床应用研究奠定基础.
作者：姜燕；吕昌龙
来源：微生物学杂志 2009 年 29卷 2期
