为建立基于酶水平和细胞水平的新型抗结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)药物的筛选模型,以M.tuberculosis H37Rv基因组DNA为模板,PCR特异性扩增异柠檬酸裂解酶(ICL)基因,构建表达载体,在E.coli BL21(DE3)中高效表达,使用Ni2+亲和层析柱纯化重组ICL,检测其活性.优化ICL酶反应条件,考察待筛选样品溶剂对酶活性的影响,建立ICL抑制剂酶水平筛选模型;考察与优化耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegma)在以乙酸盐为唯一碳源的培养基中的生长状况,建立基于M.smegma的乙醛酸代谢途径抑制剂的细胞水平筛选模型;利用上述2种筛选模型对1060种可能具有拮抗活性的微生物代谢样品进行初筛和复筛,两者筛选结果正相关性较好.
作者：张磊磊；由鹏飞；姚广新；侯爵；张怡轩
来源：微生物学杂志 2011 年 31卷 1期
