通过构建表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)CFP10基因的重组腺病毒,探讨CFP1C蛋白对A549细胞炎性因子表达的影响.采用酶切、连接的方法将CFP10编码基因插入到腺病毒穿梭质粒pShuttle-AdV4中,构建重组穿梭质粒pShuttle-AdV4-CFP10,重组穿梭质粒经测序验证后和骨架质粒pGP-Ad.Pac Vector经限制性内切酶Pac I酶切线性化后共转染至HEK 293A细胞中进行病毒包装,获得重组腺病毒AdV4-CFP10,经定量PCR和Western blot验证后进行病毒扩增,CsCl密度梯度离心纯化获得高纯度的重组腺病毒.AdV4-CFP10感染II型肺泡上皮细胞A549,利用荧光定量PCR和ELISA技术检测A549细胞中细胞因子IL-1α、IL-6、IL-8和TNF-o等的表达水平,初步探究CFP10对A549细胞炎性因子分泌的影响.成功构建了表达结核分枝杆菌CFP10基因的重组腺病毒AdV4-CFP10,AdV4-CFP10转染至A549细胞后,与空病毒相比,过表达CFP10显著上调A549细胞炎性因子的分泌水平.为进一步深入研究结核分枝杆菌CFP10蛋白对A549细胞炎性反应的调控机制提供参考.
作者：王健宏；徐兆坤；李武
来源：微生物学杂志 2020 年 40卷 5期
