目的：以乙肝病毒表面抗原为载体，制备含人巨细胞病毒（HCMV）-UL138 CTL表位肽的重组酵母菌并分析其免疫效应。方法：根据蛋白质数据库获得HCMV-UL138氨基酸序列，综合应用SYFPEITHI、Net-CTL及HLA-Bind方法筛选富含CTL表位的UL138多肽，插入到乙肝表面抗原前S2（PreS2）1-9区末端再与HBsAg 序列连接，在不改变氨基酸密码的前提下，根据酵母偏爱密码子优化序列，进行全序列合成，克隆入pPIC3.5K酵母载体，构建pPIC3.5K/PreS2-HBsAg-UL13815-27重组质粒。重组质粒经Bgl II处理线性化后，电转化至GS115菌株中，构建PreS2-HBsAg-UL13815-27重组酵母，阳性整合菌株经甲醇诱导后，通过Western blot及ELISA方法鉴定目的蛋白表达。鉴定的重组酵母菌经灭活后，全菌体皮下免疫BALB/c小鼠，通过ELISA法检测HBsAg特异性血清IgG抗体；UL13815-27 CTL表位肽（VMLVLIVAILCYL）刺激免疫小鼠的脾细胞，通过检测IFN-γ表达分析诱导产生的CTL反应。结果：PCR、酶切和测序分析表明成功构建了pPIC3.5K/PreS2-HBsAg-UL13815-27重组质粒。重组酵母经甲醇诱导后，酵母裂解液中可检测到HBsAg特异性抗体识别的、分子量约33 kD目的蛋白。表达PreS2-HBsAg-UL13815-27灭活全菌体免疫小鼠后，可检测到HBsAg特异性抗体，免疫小鼠脾细

作者：张跃进；柳献云；陈向敏；田晓娟；李文姝；薛向阳

来源：温州医科大学学报 2015 年 6期