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目的 探讨外泌体(exosomes,EXOs)在乳腺癌细胞间耐药信息的传递作用.方法 选用乳腺癌敏感细胞株(MCF-7)及其阿霉素耐药株(MCF-7/ADR)为模型,用超速离心法提取MCF-7/ADR外泌体(ADR/EXO);用透射电子显微镜观察鉴定细胞外泌体形态;运用倒置荧光显微镜观察ADR/EXO与MCF-7细胞的相互作用过程;运用激光共聚焦显微镜观察MCF-7与MCF-7/ADR在Transwell小室共培养60 h后细胞内阿霉素药物浓度变化;运用CCK-8法检测ADR/EXO与MCF-7细胞共培养后对阿霉素的IC50的影响;运用RT-PCR检测MCF-7与ADR/EXO共培养后MDR1基因表达水平的变化;运用Western blot法检测MCF-7与ADR/EXO共培养12 h和72 h后P-gp表达水平的变化.结果 透射电子显微镜下,外泌体呈现典型的圆形或椭圆形杯口状结构,直径为40~100 nm;用PKH67标记ADR/EXO显示,ADR/EXO是可以被MCF-7细胞摄取;与ADR/EXO共培养后敏感细胞株MCF-7对阿霉素的IC50耐药性升高2.62倍,差异有统计学意义(P<0.05);经过与MCF-7/ADR在Transwell小室中共培养60 h后的MCF-7细胞,胞内可见阿霉素聚集减少,核区分布减少,荧光强度减弱;MCF-7+ADR/EXO组MDR1的mRNA表达量明显增加,是MCF-7组的8.69倍,差异有统计学意义(P<0.05);与MCF-7组相比,共培养12 h的MCF-7+ADR/EXO组P-gp相对表达量升高4.64倍,差

作者:许乘凤;杨振林;花义同;程凯;滕晓飞;张英哲;刘健;王晓红

来源:西安交通大学学报(医学版) 2017 年 38卷 2期

知识库介绍

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许乘凤;杨振林;花义同;程凯;滕晓飞;张英哲;刘健;王晓红
来源:
西安交通大学学报(医学版) 2017 年 38卷 2期
标签:
外泌体 乳腺癌 耐药P-gp exosome breast cancer drug resistance P-gp
目的 探讨外泌体(exosomes,EXOs)在乳腺癌细胞间耐药信息的传递作用.方法 选用乳腺癌敏感细胞株(MCF-7)及其阿霉素耐药株(MCF-7/ADR)为模型,用超速离心法提取MCF-7/ADR外泌体(ADR/EXO);用透射电子显微镜观察鉴定细胞外泌体形态;运用倒置荧光显微镜观察ADR/EXO与MCF-7细胞的相互作用过程;运用激光共聚焦显微镜观察MCF-7与MCF-7/ADR在Transwell小室共培养60 h后细胞内阿霉素药物浓度变化;运用CCK-8法检测ADR/EXO与MCF-7细胞共培养后对阿霉素的IC50的影响;运用RT-PCR检测MCF-7与ADR/EXO共培养后MDR1基因表达水平的变化;运用Western blot法检测MCF-7与ADR/EXO共培养12 h和72 h后P-gp表达水平的变化.结果 透射电子显微镜下,外泌体呈现典型的圆形或椭圆形杯口状结构,直径为40~100 nm;用PKH67标记ADR/EXO显示,ADR/EXO是可以被MCF-7细胞摄取;与ADR/EXO共培养后敏感细胞株MCF-7对阿霉素的IC50耐药性升高2.62倍,差异有统计学意义(P<0.05);经过与MCF-7/ADR在Transwell小室中共培养60 h后的MCF-7细胞,胞内可见阿霉素聚集减少,核区分布减少,荧光强度减弱;MCF-7+ADR/EXO组MDR1的mRNA表达量明显增加,是MCF-7组的8.69倍,差异有统计学意义(P<0.05);与MCF-7组相比,共培养12 h的MCF-7+ADR/EXO组P-gp相对表达量升高4.64倍,差