目的: 探讨经体外扩增、诱导分化的人骨髓间质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hMSC)作为组织工程化骨、软骨种子细胞的可行性.方法: 体外分离、培养、扩增hMSC, 以流式细胞仪检测hMSC的表面抗原.诱导hMSC向成骨细胞、软骨细胞分化. 以倒置显微镜和电子显微镜观察细胞的形态; 以组织化学、免疫组织化学和RT-PCR, 检测成骨细胞、软骨细胞的特异性标志物.结果: 分离得到的细胞可表达hMSC的特异抗原, 在体外扩增15代以上, 其形态及表面抗原保持不变. 成骨诱导培养的细胞上清液中ALP的含量高于对照组(P<0.05).成骨及成软骨诱导的细胞形态均由成纤维样梭形向多边形转变. 透射电镜观察可见大量扩张的粗面内质网、高尔基体及线粒体. 扫描电镜观察可见经成骨诱导后的细胞表面有钙盐沉积, 成软骨诱导的细胞表面有胶原样突起.成骨诱导培养后, 可见碱性磷酸酶(ALP)染色、 Ca结节染色、胶原-Ⅰ(COL-Ⅰ)及骨钙素(osteocalcin, OC)免疫组化染色阳性, 同时RT-PCR检测COL-Ⅰ、 OC mRNA表达阳性. 成软骨诱导后, 甲苯胺蓝染色见细胞周围有大量的异染性基质, 免疫组化和RT-PCR检测COL-Ⅱ表达阳性.结论: hMSC在体外可大量扩增. 在特定培养液诱导下, 可向成骨细胞及软骨细胞转化, 可作为骨、软骨组织工程的
作者：庞永刚；崔鹏程；陈文弦；曹云新
来源：细胞与分子免疫学杂志 2004 年 20卷 3期
