目的: 构建人VEGF165基因的真核表达质粒pBudCE4.1/VEGF165, 观察其在血管内皮细胞(VEC)中的表达和表达产物对VEC增殖的影响.方法: 用RT-PCR法从引产胎儿心脏组织中克隆VEGF165基因, 并将其克隆至真核表达质粒pBudCE4.1中, 对重组真核表达质粒pBudCE4.1/VEGF165进行酶切鉴定和测序.以脂质体转染法将pBudCE4.1/VEGF165导入VEC中, 用Northern blot和免疫细胞化学染色法, 分别从mRNA水平和蛋白质水平检测它们在转染的VEC中的表达, 并检测表达产物对VEC增殖的影响.结果: 人VEGF165基因的RT-PCR产物为576 bp.测序结果显示, 扩增的VEGF165基因的序列与基因文库中登录的序列完全一致.经Hind Ⅲ和BamH I酶切鉴定证实, VEGF165基因已成功地克隆至真核表达质粒pBudCE4.1中.以其转染血管内皮细胞(VEC)后, 经Northern blot杂交和免疫细胞化学染色法检测均证实VEGF165基因表达.表达产物对VEC增殖有明显的促进作用.结论: 所构建的pBudCE4.1/VEGF165真核表达质粒可在VEC中表达, 表达产物可明显促进VEC增殖, 为通过VEGF165基因转染防治移植器官内血管的狭窄奠定了基础.
作者：吴忠均；吴维伟；余林；时德；郑树森
来源：细胞与分子免疫学杂志 2004 年 20卷 6期
