目的: 表达SARS冠状病毒核衣壳蛋白(N蛋白), 并以表达产物为免疫原制备特异性单克隆抗体(mAb).方法: 采用RT-PCR方法, 从灭活的病毒抗原标本中扩增编码N蛋白的基因.测序确认后, 再亚克隆至原核表达载体中.从SDS-PAGE凝胶中回收原核表达产物后免疫BALB/c小鼠, 经融合、筛选制备特异性mAb.结果: 从标本中扩增出1 269 bp的DNA, 测序结果证实为N蛋白基因. 将该基因克隆至原核表达载体中后, 在大肠杆菌中获得了较好的表达.表达产物经SDS-PAGE后, 在Mr约为43 000处可见1条明显的诱导表达带.Western blot的结果表明, 该电泳带与SARS患者的恢复期血清呈特异的免疫反应.从SDS-PAGE凝胶中回收表达产物并免疫BALB/c小鼠, 制备出3株抗N蛋白的mAb.这些mAb与SDS-PAGE凝胶上Mr约为43 000的蛋白带也呈现很强的免疫反应.结论: 所获的重组N蛋白及特异性mAb, 将为进一步建立SARS病毒感染早期诊断的方法奠定了基础.
作者：王平；黄庆生；薛小平；雷迎峰；王海涛；任君萍；丁天兵；徐志凯
来源：细胞与分子免疫学杂志 2005 年 21卷 1期
