目的:构建人干扰素α的高效表达质粒pEE14.1-IFN-α,并在真核细胞中验证其表达.方法:通过PCR获得人IFN-α基因,连入过渡载体pCI-GPI,然后克隆入高效表达载体pEE14.1中,构建重组表达质粒pEE14.1-IFN-α.瞬时转染293T细胞后48 h收获上清,采用ELISA,Western blot分别验证目的基因表达.结果:pEE14.1-IFN-α经酶切和测序分析,与预期设计完全一致,表明重组质粒构建成功.ELISA法检测瞬时转染细胞上清中α干扰素含量,浓度约为3.15ng/mL,说明表达的蛋白有免疫活性,Western blot检测也显示该重组质粒在上清中分泌表达.结论:成功构建高效表达质粒pEE14.1-IFN-α,为慢性乙肝免疫治疗提供新的备选方案.
作者：高燕；汪习；张巍；徐元基；于继云；郭炳冉；阎瑾琦
来源：细胞与分子免疫学杂志 2012 年 28卷 4期
