目的 构建人ficolin-3基因的原核表达载体在大肠杆菌中表达后纯化,检测可溶性His-ficolin在诱导巨噬细胞系RAW264.7活化中的作用.方法 从人外周血单个核细胞cDNA中扩增人ficolin-3基因的cDNA序列,将其插入pET22原核表达载体中,酶切鉴定并测序验证重组质粒pET22b-ficolin 3后,在大肠杆菌BL21中诱导表达并纯化His-ficolin 3.以His蛋白为对照,利用流式细胞术检测不同浓度可溶性His-ficolin 3对RAW264.7细胞吞噬鸡红细胞能力的影响,利用ELISA检测His-ficolin 3对RAW264.7细胞分泌IL-6、IL-12和TNF-α的影响.结果 酶切鉴定获得预期目的片段,测序证实重组质粒pET22b-ficolin 3构建成功.SDS-PAGE提示相对分子质量(Mr)33 000处有可溶性目的蛋白His-ficolin 3表达,His柱纯化后产物纯度在90％以上.Western blot法检测证实纯化产物为His-ficolin3.和His蛋白相比,His-ficolin 3对RAW264.7细胞的吞噬能力具有剂量依赖性,即His-ficolin 3浓度越高,吞噬能力越强;此外,His-ficolin 3能显著诱导RAW264.7细胞分泌IL-6、IL-12和TNF-α等炎性细胞因子.结论 成功构建了pETb-Ficolin 3重组载体并获得了纯度为90％以上的His-ficolin 3.His-ficolin 3能够显著促进巨噬细胞RAW264.7的活化.

作者：郭江涛；曹旭晴；王志军

来源：细胞与分子免疫学杂志 2014 年 30卷 7期