目的 将肝素结合血凝素(HBHA)重组表达于耻垢分枝杆菌(MS),鉴定其对A549细胞自噬作用的影响.方法 将HBHA克隆于穿梭表达质粒pMV261,构建HBHA重组载体,电转化至MS;感染A549细胞,Western blot法鉴定A549细胞微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达情况,并检测LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值的变化可估计自噬的水平;利用单丹磺酰尸胺(MDC)将自噬体染色后,激光共聚焦观察细胞内自噬体变化的情况;通过MS、rMS-HBHA感染A549细胞18 h,计算胞内活菌数,鉴定感染状况.结果 rMS-HBHA经42℃热诱导成功表达HBHA蛋白;相对野生型MS,重组表达HBHA蛋白的MS (rMS-HBHA)可以显著抑制A549细胞中的LC3 Ⅰ和LC3Ⅱ的表达,rMS-HBHA组的LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值为0.625显著低于MS组2.025,表明rMS-HBHA组自噬体形成受到抑制;并且rMS-HBHA感染A549细胞18h后胞内活菌为6.3×106,明显高于MS组1×10s.结论 外源性HBHA可以通过抑制A549细胞的自噬作用增强MS的感染能力.
作者：郑青；杨柳；杨静；周珊；周磊；韩若冰；郝晓柯；马越云
来源：细胞与分子免疫学杂志 2014 年 30卷 7期
