目的 构建大鼠FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,观察其对巨噬细胞的作用.方法 以大鼠肝脏mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒四环素(Tet)顺式应答元件(TRE),构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒.将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒调节质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,分别包装表达病毒和调节病毒,测定表达病毒和可诱导病毒感染滴度.表达病毒和调节病毒共感染巨噬细胞,经梯度浓度强力霉素(DOX)诱导,免疫荧光技术检测巨噬细胞FcγRⅡB表达,实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA表达,Western blot法检测FcγRⅡB蛋白表达.经不同浓度DOX诱导后的腹腔巨噬细胞分别检测吞噬和趋化功能.结果 重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确.表达和调节病毒滴度均达到106转导单位/mL.巨噬细胞被病毒感染后经DOX诱导表达FcγRⅡB,免疫荧光染色结果显示,FcγRⅡB能够在巨噬细胞表达;实时荧光定量PCR和Western blot结果显示FcγRⅡB表达水平与DOX浓度呈正相关.巨噬细胞的吞噬和趋化功能与FcγRⅡB表达呈负相关.结论 调节巨噬细胞FcγRⅡB的表达可抑制其吞噬和趋化功能.
作者：郑修军；王琦；曹秀琴；杨志伟
来源：细胞与分子免疫学杂志 2015 年 31卷 8期
