目的 观察淀粉样前体蛋白(APP) β位点单链抗体(scFv)对APP的α和β代谢的影响,为其作为APPβ分泌酶特异抑制剂奠定基础.方法 以APP β位点scFv 2H10基因序列为模板,通过PCR引入Igκ轻链信号序列和myc标签,与真核表达载体pcDNA3.1hyg(+)相连,转染过表达人瑞典突变型淀粉样前体蛋白695(APP695)的CHO细胞株(APP695 sw/CHO),经潮霉素B筛选出稳定转染细胞株,用夹心ELISA检测稳定转染细胞株培养上清中Aβ40和分泌型APPα(sAPPα)的含量,并分别比较两者的变化.结果 经PCR、酶切和测序鉴定证明,获得引入Igκ分泌信号和myc标签的APP β位点scFv基因片段,且与真核表达载体正确相连.转染APP695 sw/CHO细胞后,经潮霉素B筛选得到稳定转染株;Western blot法可检测到目的蛋白表达,ELISA结果显示,与对照相比,稳定转染细胞培养上清Aβ40分泌量约下降30.4％、sAPPα水平上升23.1％.结论 APP β位点scFv在抑制Aβ分泌的同时还可能有利于APP的α代谢,可作为β分泌酶高特异性抑制剂.
作者：黄巍；周丽荣；李小鸥；孙红霞；周婷；黄晓刚；刘桥
来源：细胞与分子免疫学杂志 2015 年 31卷 10期
