目的 制备兔抗人黑素瘤相关抗原D4 (MAGE-D4)多克隆抗体,鉴定其免疫学特性,并进行初步应用.方法 对构建的pMAL-C2/MAGE-D4重组质粒进行原核表达及纯化,获得MBP/MAGE-D4融合蛋白,并以此蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体.抗体经蛋白A凝胶柱亲和层析法纯化后,通过SDS-PAGE检测其纯度;间接ELISA、Western blot法检测抗体的效价及特异性;免疫组织化学染色法检测肺癌组织中MAGE-D4的表达及定位.结果 获得纯度较高的抗MAGE-D4多克隆抗体,ELISA检测抗体的效价为1∶256 000,Western blot法分析显示MAGE-D4多克隆抗体可特异性识别MAGE-D4重组蛋白,免疫组织化学结果表明,该抗体能识别肺癌组织中的内源性MAGE-D4蛋白,表达的阳性率为69.6％(17/23).结论 制备的MAGE-D4多克隆抗体具有较高的特异性和灵敏度.
作者：贺菽嘉；顾永耀；肖绍文；张庆梅；陈芳；罗彬；付骏；谢小薰
来源：细胞与分子免疫学杂志 2017 年 33卷 1期
