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目的 探讨慢病毒介导的短发夹RNA(shRNA)敲低NB4急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-I)对全反式维甲酸(ATRA)诱导NB4细胞分化的影响及其机制.方法 将含有人RIG-I基因shRNA序列(RIG-I-shRNA)及含绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒感染NB4细胞,实时定量PCR (qRT-PCR)及Western blot法分别检测ATRA诱导前后NB4细胞RIG-I mRNA和蛋白水平;流式细胞术观察慢病毒感染效率和RIG-I-shRNA对ATRA诱导NB4细胞分化的影响;Western blot法检测敲低RIG-I水平后,ATRA处理对蛋白激酶B308位苏氨酸(AKT-Thr308)磷酸化的调控效应.结果 含RIG-I-shRNA序列的慢病毒可成功感染NB4细胞,下调ATRA诱导的RIG-I水平;敲低RIG-I后,明显抑制ATRA诱导NB4细胞分化,同时上调AKT-Thr308磷酸化水平.结论 敲低NB4细胞RIG-I蛋白可上调AKT-Thr308磷酸化水平抑制ATRA诱导的急性早幼粒白血病细胞分化.

作者:陈磊;苏卫东;邱丽君;庞华

来源:细胞与分子免疫学杂志 2017 年 33卷 6期

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作者:
陈磊;苏卫东;邱丽君;庞华
来源:
细胞与分子免疫学杂志 2017 年 33卷 6期
标签:
维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-I) 慢病毒 RNA干扰技术(RNAi) 细胞分化 蛋白激酶B(AKT)
目的 探讨慢病毒介导的短发夹RNA(shRNA)敲低NB4急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-I)对全反式维甲酸(ATRA)诱导NB4细胞分化的影响及其机制.方法 将含有人RIG-I基因shRNA序列(RIG-I-shRNA)及含绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒感染NB4细胞,实时定量PCR (qRT-PCR)及Western blot法分别检测ATRA诱导前后NB4细胞RIG-I mRNA和蛋白水平;流式细胞术观察慢病毒感染效率和RIG-I-shRNA对ATRA诱导NB4细胞分化的影响;Western blot法检测敲低RIG-I水平后,ATRA处理对蛋白激酶B308位苏氨酸(AKT-Thr308)磷酸化的调控效应.结果 含RIG-I-shRNA序列的慢病毒可成功感染NB4细胞,下调ATRA诱导的RIG-I水平;敲低RIG-I后,明显抑制ATRA诱导NB4细胞分化,同时上调AKT-Thr308磷酸化水平.结论 敲低NB4细胞RIG-I蛋白可上调AKT-Thr308磷酸化水平抑制ATRA诱导的急性早幼粒白血病细胞分化.