目的 构建EB病毒潜伏期膜蛋白1(LMP1)基因的真核表达载体,通过电穿孔法转染人B淋巴瘤细胞株Ranmos细胞,建立稳定的LMP1表达细胞株.方法 扩增带有EcoR Ⅰ与BamH Ⅰ酶切位点的LMP1编码基因,克隆至pcDNA3.1-EF1a-mcs-3FLAG-CMV-EGFP真核表达载体,挑取阳性单克隆感受态细胞行PCR以及测序后将重组质粒通过电穿孔法转染Ramos细胞,G418筛选稳定表达LMP1的细胞株,PCR和Western blot法分别检测LMP1 mRNA和蛋白在Ramos细胞中的表达.结果 PCR与测序证实成功构建了LMP1重组质粒,建立了稳定转染的Ramos细胞,且LMP1蛋白可在细胞中成功表达.结论 成功建立了稳定表达LMP1的Ramos细胞.
作者：张令歌；赵旋；辛苗苗；王丽芹；温大蔚；高岩岩；罗兵；孙明姝
来源：细胞与分子免疫学杂志 2019 年 35卷 3期
