目的 构建靶向大鼠pa ralemmin-3 (PALM3)基因的短发夹shRNA(RNA)重组腺病毒载体,干扰大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AE2 cells)中PALM3的表达.方法 设计大鼠靶向PALM3基因的shRNA,插入穿梭质粒pGV120-EGFP,行PCR、测序鉴定;将穿梭质粒和骨架质粒共转293细胞,进行重组腺病毒Ad-palm3-shRNA-EGFP的包装,并采用TCID50法测定病毒感染滴度;用此病毒感染大鼠AE2细胞,Western blot法检测细胞内PALM3蛋白表达.结果 穿梭质粒pGV120-palm3-shRNA-EGFP经PCR及测序鉴定证实构建成功,进一步构建了表达大鼠PALM3基因shRNA的重组腺病毒载体Ad-palm3-shRNA-EGFP,重组腺病毒感染滴度为3×1010 pfu/mL,感染大鼠AE2细胞后显著抑制目的蛋白表达(P＜0.05).结论 本实验成功构建了针对大鼠PALM3基因的shRNA重组腺病毒,显著下调了大鼠AE2细胞中PALM3的表达,为进一步探索PALM3在炎性失控性疾病中的作用奠定基础.
作者：付玉梅；陈旭昕；韩志海
来源：西部医学 2015 年 27卷 8期
