目的:在大肠杆菌内表达穿膜肽与凋亡蛋白的融合蛋白,观察其诱导肺腺癌Anip973细胞凋亡的活性,并了解其是否有剂量依赖性.方法:实验于2005-08/2006-01在哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室完成.①在大肠杆菌中表达穿膜肽-凋亡蛋白并用IDA-Ni2+亲和层析纯化.②细胞增殖抑制实验:取对数生长期人脐静脉内皮细胞和Anip973细胞接种于96孔培养板中,培养12 h后加入终浓度分别为0,10,20,30,50,50mg/L融合蛋白培养48 h,弃上清,每孔中加入四甲基偶氮唑盐溶液(5g/L)20μL,继续孵育4 h,检测吸光度,计算肿瘤生长抑制率.③取对数生长期人脐静脉内皮细胞、Anip973细胞,每种细胞分成两组:给药组加入终浓度为30 mg/L穿膜肽-凋亡蛋白,对照组加入相同体积的磷酸盐缓冲液,继续培养48 h.苏木精-伊红染色,光镜下观察细胞形态;溴乙啶/丫啶橙荧光染色观察细胞凋亡率.结果:①细胞增殖抑制实验结果表明浓度为10～50 mg/L穿膜肽-凋亡蛋白对人脐静脉内皮细胞没有明显抑制作用,对Anip973细胞呈剂量依赖性抑制作用,半数抑制浓度为27 mg/L.②30 mg/L穿膜肽-凋亡蛋白作用48 h后,人脐静脉内皮细胞形态没有显著改变,对照组和给药组的凋亡率分别为(2.9±0.4)
作者：陶站华；刘兴汉；张宇雯；马洪星；刘远莉；栗亚
来源：中国临床康复 2006 年 10卷 20期
