目的:构建携带人血管内皮细胞生长因子121 cDNA的腺病毒表达载体,探讨应用血管内皮细胞生长因子基因治疗缺血性疾患的可行性.方法:实验于2003-05/2004-02于解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所第6研究室(创伤烧伤复合伤国家重点实验室)完成.穿梭质粒pDC315和Ad5腺病毒基因组质粒pBHGloxdeltaE1,3Cre由解放军第三军医大学免疫学教研室邹强博士惠赠.pUC18-血管内皮细胞生长因子由第三军医大学高原医学教研室惠赠.BamHⅠ,XbaⅠ,NcoⅠ DNA限制性内切酶均购自Takara公司;鼠抗人血管内皮细胞生长因子121单克隆抗体购自ROCHE公司;用双酶切法将pUC18-人血管内皮细胞生长因子121质粒中的人血管内皮细胞生长因子121 cDNA克隆到穿梭质粒pDC315中,与腺病毒质粒pBHGloxdeltaE1,3Cre共同转染293细胞并反复扩增,构建携带目的基因的重组腺病毒,并进行滴度测定.用重组腺病毒感染NTH3T3细胞,用免疫组化方法检测人血管内皮细胞生长因子121在NTH3T3细胞中的表达.结果:①重组质粒pDC315-人血管内皮细胞生长因子121的鉴定:重组质粒经XbaⅠ和NcoⅠ酶切后,得到酶切片段长度为651 bp的正向连接重组质粒.测序结果也证实作者重组质粒pDC315-人血管内皮细胞生长因子121序列正确.②Ad-血管内皮细胞生长因子重组腺病毒构建及滴度
作者：王建忠；李兵仓；陈菁；陈志强
来源：中国临床康复 2006 年 10卷 25期
