目的:采用组织块培养法、单细胞悬液法、滤网过滤改良法分离培养鼠胚胎成纤维细胞,比较不同分离方法对其生长形态、生长曲线及细胞周期的影响.方法:实验于2006-03/09在辽宁医学院解剖实验室完成.①选取清洁级昆明种七八周龄雄性小鼠10只,4周龄雌性小鼠20只,雄雌鼠按1∶2合笼,次日晨检查有阴栓者记为孕0.5 d,选择孕12.5～14.5 d雌鼠断颈处死,取出胎鼠,去除胚胎头部、内脏和四肢,将躯干部用无菌眼科剪剪成1 mm3以下的碎块,分别用以下方法进行分离培养.②组织块培养法:将剪碎的组织块吸置于离心管内,加入1 mL消化液(含2.5 g/L胰蛋白酶和0.4 g/L乙二胺四乙酸的磷酸盐缓冲液),吹吸30 s,加入等体积的完全培养基(含体积分数为0.1的胎牛血清)终止消化,弃上清液,留下鼠胚组织块沉淀物,按相互距离0.5 cm放入培养瓶内,培养箱静置2～4 h后,加入适量完全培养基,3 d换液一次.③单细胞悬液法:将剪碎的组织块加入1 mL消化液,吹打30 s,室温下静置3～5 min,吸取上层液体,再加入消化液,重复上述操作五六次,最后弃组织块,将收集的上层液离心,1 000 r/min离心5 min,弃上清液,加入完全培养基5 mL,吹打均匀后吸至培养瓶内培养.培养条件、换液时间与组织块培养法相同.④滤网过滤改良法:将剪碎的组织块加入1 mL消化液,吹打30 s,37
作者：张海锋；单伟；秦书俭
来源：中国组织工程研究与临床康复 2007 年 11卷 11期
