目的:以脐血CD34+细胞为起始细胞,分别在人体外和肝受损的重度联合免疫缺陷小鼠体内诱导CD34+细胞向肝细胞转化.方法:实验于2004-09/2005-06在反应器工程国家重点实验室进行.取健康足月产妇的新鲜脐血,产妇知情同意.采用密度梯度离心法分离脐血单个核细胞.将单个核细胞悬浮于免疫磁珠法缓冲液中,获取CD34+细胞.将CD34+细胞在干细胞因子+白细胞介素3+白细胞介素6细胞因子组合中培养1周,然后在肿瘤抑制素+成纤维细胞因子1+成纤维细胞因子2+白血病抑制因子+肝细胞生长因子+表皮生长因子组合中诱导其向肝细胞分化.将2-乙酰氟氨以0.4 mg/只的剂量通过腹腔注射输入到重度联合免疫缺陷小鼠体内.7 d后再腹腔注射入0.4 mL/kg的CCl4,同时向实验组小鼠尾部静脉注射CD34+细胞,对照组小鼠则仅输注2-乙酰氨芴和CCl4.分别于4,6周后采用流式细胞术检测小鼠肝脏中的人源细胞,并用RT-PCR和免疫组化方法检测人源血清白蛋白基因和抗原的表达.结果:①CD34+细胞体外培养过程中,细胞总数扩增了近30倍,并且在培养21 d收获的细胞中可检测到人血清白蛋白基因和抗原的表达,CD34+在体外被诱导成肝样细胞.②采用流式细胞术检测重度联合免疫缺陷小鼠肝脏中的人源细胞,并用RT-PCR和免疫组化的方法检测人源血清白蛋白基因和抗原的表达,4周
作者：金颖；蔡海波；谭文松
来源：中国组织工程研究与临床康复 2007 年 11卷 11期
