目的:观察款冬花粗多糖对体外培养人白血病K562细胞有无凋亡诱导作用.方法:实验于2006-06-25/2006-09-08在河北北方学院实验中心细胞生物学实验室、分子生物学实验室、药物研究实验室完成.①款冬花粗多糖的提取:称取已干燥粉粹的款冬花417.0 g,加入1 000 mL体积分数0.85乙醇回流提取1 h,滤过,滤渣加入1 000 mL三蒸水回流提取2 h,过滤,滤渣再加入1 000 mL三蒸水回流提取2 h,合并2次滤液,减压浓缩至适量,四倍体积无水乙醇醇沉,静置过夜,过滤,沉淀依次用无水乙醇、丙酮、石油醚洗涤,即得款冬花粗多糖.苯酚-硫酸法测定款冬花粗多糖含量以生药计算为122.9 mg.制成102.5 g/L粗多糖溶液.②人白血病K562细胞的生长抑制实验:体外培养的K562细胞经10,30,50,70,90 mg/L的款冬花粗多糖作用48 h后,通过Hoeehst33258染色在荧光显微镜下进行形态学观察、采用琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术检测细胞凋亡.结果:①经款冬花粗多糖作用后,荧光显微镜下发现体外培养的K562细胞中出现核固缩、凋亡小体.②经不同质量浓度款冬花粗多糖处理的K562细胞DNA电泳均出现相差约200bp的DNA梯子状条带.③流式细胞仪检测发现,经不同质量浓度款冬花粗多糖处理的K562细胞,有凋亡峰.结论:款冬花粗多糖可诱导体外培养人白血病细胞K562凋亡.
作者：张秀昌；刘华；刘玉玉；孙黎；田嘉铭；贾天军
来源：中国组织工程研究与临床康复 2007 年 11卷 11期
