目的:自囊胚内细胞团分离培养患者自身的胚胎干细胞并将其诱导分化为目的细胞可用于特定疾病的治疗.实验采用昆明小鼠3.5 d囊胚分离培养胚胎干细胞,并将其诱导分化为胰岛素前体细胞.方法:实验于2005-09/2006-11在哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室完成.①选取妊娠3.5 d昆明雌性小鼠123只,至13.5 d时取11只用于胚胎成纤维细胞饲养层制备.剩余112只妊娠3.5 d小鼠冲胚后,挑取扩展充分、囊胚内细胞团明显的囊胚采用胰酶+乙二胺四乙酸机械法分离培养胚胎干细胞,进行碱性磷酸酶染色和Oct-4免疫荧光染色鉴定.②在细菌培养皿的盖上用不含人重组白血病抑制因子的胚胎干细胞培养液制备液滴,选取生长旺盛、形态典型的胚胎干细胞集落,采用胰酶+乙二胺四乙酸机械法悬浮培养4 d,形成拟胚体,行巢蛋白免疫荧光染色.③将胚胎干细胞诱导分化为胰岛素前体细胞,首先需要L-多聚赖氨酸和纤维粘连蛋白包被培养皿,然后用ITSFn筛选液(含5 mg/L胰岛素、50 mg/L转铁蛋白、30 nmol/L亚硒酸钠、5 mg/L纤维粘连蛋白的DMEM/F12培养液)筛选巢蛋白阳性细胞6 d,碱性成纤维细胞生长因子扩增及初步诱导6 d,再以烟碱诱导功能成熟的胰岛素前体细胞27 d.应用DTZ染色、Insulin免疫荧光染色对诱导的细胞进行鉴定.结果:①胚胎干细胞的分离培养:将
作者：王锦绣；刘慧雯；鲍君红
来源：中国组织工程研究与临床康复 2007 年 11卷 15期
