目的:神经干细胞能够分化为神经元和神经胶质细胞,但其纯化、培养技术尚不完善.通过不同接种密度和传代方法,筛选优化神经干细胞的体外培养技术.方法:实验于2006-05/12在四川大学移植免疫实验室完成.①动物:选取清洁级孕12～16 d雌鼠,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.②实验方法:取孕鼠胚胎脑皮质,胰蛋白酶+乙二胺四乙酸消化组织,分离神经干细胞,加入含B27、碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子的DMEM/F12培养基,传至第3代时,调整细胞密度至1×107 L-1,1×108 L-1,1×109 L-1,1×1010 L-1进行培养.另取原代培养7～10 d后的神经干细胞,收集形成的细胞球,机械吹打法传代是离心后用由粗到细的吸管轻柔吹打,或用带5号针头的无菌注射器吹打分离细胞,操作中避免产生气泡,使用注射器时吹打的次数保持5次.胰酶消化联合机械吹打法传代是离心后加入胰蛋白酶,37 ℃水浴10 min,用由粗到细且经火焰抛光的吸管轻柔吹打,或用带5号针头的无菌注射器吹打,以胎牛血清终止消化.③实验评估:观察第3代神经干细胞生长状态,MTT法检测各密度下培养1,3,5,7 d时的增殖情况.计数两种传代方法亚代神经干细胞形成的克隆球数目,比较增殖效果.免疫荧光染色检测神经球巢蛋白、BrdU标记、神经元特异性烯醇化酶、胶质细胞原纤维
作者：钟德君；张德盛；宋跃明
来源：中国组织工程研究与临床康复 2007 年 11卷 50期
