背景:以往利用羊膜提取间充质干细胞的研究多将注意力放在新鲜的羊膜标本上,由于地域和时间的限制,对羊膜进行保存是必须面对的实际问题.目的:实验拟比较从不同保存时间人羊膜标本中分离培养的羊膜间充质干细胞的增殖能力.设计、时间及地点:体外进行的细胞对照观察,于2007～01/2008-02在郑州大学医学院和生物工程系完成.材料:正常剖宫产的健康产妇志愿捐献的羊膜12份,孕38周,检测乙肝5项、HCV、HIV、梅毒等其他相关传染性指标均呈阴性.方法:无菌条件下将每份新鲜完整的羊膜平均分成3组,即新鲜1 h组、4℃放置24～36 h组、4℃放置48～60 h组.将3组标本剪碎,胰蛋白酶,胶原酶联合消化,过滤后收集单细胞悬液,以2×108 L-1密度接种,加入含胎牛血清和碱性成纤维细胞生长因子的DMEM/F12培养基,贴壁法纯化扩增细胞.主要观察指标:倒置昆微镜下观察细胞形态,绘制生长曲线.取第3代细胞进行免疫组织化学检测和流式细胞仪鉴定.结果:①3组标本消化后都含有多种单个细胞成分,呈圆形、菱形、短梭形、多角形,细胞折光性良好,此外还有多个上皮细胞聚集所成的细胞团.接种后1～3 d各组细胞均为潜伏期;4～7 d新鲜1 h组与4℃放置24～36 h组进入对数生长期,细胞增殖活跃,细胞数目旱指数级递增,4℃放置48～60 h组仍处于潜伏期;7 d
作者：常克亮；关方霞；杨波；杜英；李祥生；宋来君；胡祥
来源：中国组织工程研究与临床康复 2008 年 12卷 25期
