背景:粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(human granuiococyte-maerophage colony stimulating factor,hGM-CSF)足刺激造血前体细胞分化及增殖的细胞因子,同时在机体免疫调节过程中具有重要作用.大肠杆菌表达系统所具有的低成本、高产量等优点则是其他体系无法比拟的,因此仍是目前最常用的外源基因表达系统.目的:观察重组人粒细胞集落刺激因子在大肠杆菌中的表达.设计、时间及地点:观察性实验,于2007-02/06在三峡大学生物技术研究中心实验室完成.材料:质粒pBR322hGM-CSF购自美国ATCC菌种保藏中心.hGM-CSF抗体购自Sigma公司,IPTG、X-gal和载体pMGT-18,购自上海生物工程技术公司.方法:根据hGM-CSF基因序列设计出引物,以克隆载体质粒pBR322-hGM-CSF为模板,得到hGM-CSF基因并重组入原核表达载体pGEX-4T-1中,将经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌DH5 α,用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定并用Western bloting检测.主要观察指标:hGM-CSF在大肠杆菌中的表达.结果:SDS-PAGE显示,得到相对分子量为40 500的目的蛋白,表达量町达菌体总蛋白的17.9
作者：谢伟；乐超银；王健；刘敏；何光源
来源：中国组织工程研究与临床康复 2008 年 12卷 46期
