背景:目前常用分离气管上皮细胞的方法有蛋白酶法和胰酶法,但各有不足,控制不好会影响细胞的增殖和活力.目的:改进气管上皮细胞培养技术,比较链酶蛋白酶、胰酶和联合消化3种不同酶消化法在培养气管上皮细胞中的区别.设计、时间及地点:对比观察,实验于2007-09/2008-07在同济大学分子生物开放实验室和解放军第二军医大学动物实验室完成.材料: SD雄性大鼠12只,体质量200～250 g.链酶蛋白酶、胰酶为Gibco公司产品.方法:将SD大鼠分3组,每组4只.链酶蛋白酶组使用1 g/L链酶蛋白酶在4℃消化18 h;胰酶冷消化组使用2.5 g/L胰酶4℃消化18 h;联合消化组使用链酶蛋白酶4℃消化18 h后用2.5 g/L胰酶37 ℃消化5 min,用以上3种方法分离、培养SD大鼠气管上皮细胞.主要观察指标:用细胞计数板,激光共聚焦显微镜测定细胞分离的数量以及纯度、成活率.结果:链酶蛋白酶、胰酶冷消化和联合消化法所得细胞数量分别为(1.21±0.17)×106;(1.35±0.13)×106和(1.36±0.16)×106.联合消化法所得细胞状态最好,贴壁能力和增殖能力最好,其次为链酶蛋白酶法,胰酶冷消化法较差.结论:链酶蛋白酶与胰酶的联合法是一种有效的培养气管上皮细胞的方法.
作者：张瑜；韩彪；陈昶；杨振华；胡雪飞
来源：中国组织工程研究与临床康复 2009 年 13卷 5期
