背景:如何简易高效分离纯化人外周血单核细胞并刺激成熟为树突状细胞,未见标准化操作流程.目的:观察明胶法分离外周血单核细胞的效率以及将分离出的单核细胞刺激成熟为树突状细胞的表型特征,并与普通塑料黏附法对比.方法:使用人淋巴细胞分离液分离人外周血得到单个核细胞,根据培养瓶是否进行明胶包被分为明胶包被组和普通塑料组.均分单个核细胞,按组别分离获得单核细胞并诱导刺激成熟为树突状细胞.计数各组所得单核细胞数,使用流式细胞仪检测2 组单核细胞的CD14 阳性率、T、B 淋巴细胞污染率、树突状细胞非成熟期和成熟期CD1a,CD83 的表达情况,锥虫蓝拒染法计算细胞活率,观察对比2 组血小板污染情况.结果与结论:明胶包被组单核细胞数及CD14 阳性率显著高于普通塑料组(P < 0.05),普通塑料组淋巴细胞污染率显著高于明胶包被组(P < 0.05).2 组细胞活率及树突状细胞表型差异无显著性意义(P >0.05).明胶包被组血小板污染率低于普通塑料组.提示明胶法可以简单高效分离出单核细胞并成功刺激成熟为树突状细胞.
作者：马明瑛；靳志平；王伟；郭智；吴彬；谭晓华
来源：中国组织工程研究 2012 年 16卷 10期
