背景:已有研究证实血管内皮生长因子在正常肝脏肝部分切除后余肝的再生过程中发挥着重要的作用,但关于其对肝硬化肝脏是否也有相同作用国内外鲜有报道.目的:构建携带人血管内皮生长因子165 基因的慢病毒载体,体外转染BLR 3A 大鼠肝细胞并观察该细胞中人血管内皮生长因子165 基因的表达.方法:采用DNA 重组技术将人血管内皮生长因子165 基因克隆入pLenti6/V5-D-TOPO 慢病毒表达载体中,筛选出阳性克隆与慢病毒包装系统ViraPowerTM Packaging Mix 共转染293T 细胞产生病毒颗粒,通过实时定量-聚合酶链反应法测定病毒滴度;携带人血管内皮生长因子165 基因的慢病毒载体体外转染BLR 3A 大鼠肝细胞72 h 后,利用反转录-聚合酶链反应及Western blot 法检测细胞中人VEGF165 mRNA 及蛋白的表达.结果与结论:成功构建了表达人VEGF165 基因的慢病毒载体pLenti6/V5-D-TOPO-VEGF165,测得病毒滴度为1.18×107 VP/mL.重组慢病毒载体转染BLR 3A 大鼠肝细胞72 h 后,荧光蛋白表达率超过80
作者：易超；王喜艳；李海军；王海
来源：中国组织工程研究 2012 年 16卷 11期
